對大多數以碳酸鹽作為pH緩沖系統的培養液而言，為了維持穩定的pH，培養箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以保持培養液中溶解的二氧化碳 的濃度。同時細胞培養的器皿需要一定程度的透氣，以便于氣體的交換。

　　是不是采用其他pH緩沖系統就不需要二氧化碳培養箱了呢?人們發現由于空氣中的二氧化碳濃度很低，如果細胞不在二氧化碳培養箱中培養，培養液中的HCO3-會被耗盡，這樣會影響細胞的正常生長。所以大部分動物細胞的培養，還是需要二氧化碳培養箱。細胞培養液中常附加其他的pH緩沖系統，比如HEPES緩沖系統，來增加pH緩沖能力。HEPES在pH7.2-7.4之間有很強的緩沖能力，當透氣的培養器皿被拿到二氧化碳培養箱外面的時候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養液中碳酸鹽緩沖系統就會失去效果，這時候HEPES緩沖系統就能繼續保持 pH的穩定。