一般細胞培養液的pH在7.2-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統是一種生理pH緩沖系統(它是人體血液中重要的pH緩沖系統)，大多數培養液用它來保持穩定的pH。用粉末配制培養液時，常常需要加入一定量的碳酸氫鈉。

     對大部分以碳酸鹽作為pH緩沖系統的培養液而言，以為了維持穩定的pH，培養箱中的二氧化碳需要維持在3-10%之間，以保持培養液中溶解的二氧化碳的濃度。同時細胞培養的器皿需要一定程度的透氣，以便于氣體的交換。那么是否采用其他pH緩沖系統就不需要二氧化碳培養箱了呢?人們發現由于空氣中的二氧化碳濃度很低，如果細胞不在二氧化碳培養箱中培養，培養液中的碳酸氫根就會被耗盡，這樣會影響細胞的正常生長。所以大多數動物細胞的培養，都是需要二氧化碳培養箱的。

     細胞培養液中常附加其他的pH緩沖系統，比如hepes緩沖液，來增加pH緩沖能力。hepes在pH7.2-7.4之間有很強的緩沖能力，當透氣的培養器皿被拿到二氧化碳培養箱外面的時候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養液中碳酸鹽緩沖液就會失去效果，這時候hepes緩沖液就能繼續保持pH的穩定。