此方法適用于小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：
1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞于2ml LB培養基
2、37℃振蕩培養箱過夜
3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液
4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合
5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH，1％ SDS)，輕輕翻轉混勻，置于冰浴5 min 
6、加入0.15ml預冷溶液III(5 mol/L KAc，pH4.8)，輕輕翻轉混勻，置于冰浴5 min 
7、以10,000rpm離心20min，取上清液于另一新Ep管
8、加入等體積的異戊醇，混勻后于0℃靜置10min
9、再以10,000rpm離心20min，棄上清
10、用70％乙醇0.5ml洗滌一次，抽干所有液體
11、待沉淀干燥后，溶于0.05mlTE緩沖液中